පුවත්

පුවත්

Polyacrylamide gel electrophoresis සඳහා පූර්වාරක්ෂාවන්

· පොලිඇක්‍රිලමයිඩ්ජෙල් ඇක්‍රිලමයිඩ් මොනෝමර්, බහුඅවයවීකරණ ආරම්භක ද්‍රව්‍ය, උත්ප්‍රේරක සහ ලුණු සහ බෆර මිශ්‍රණයේ අයිතිය එක්ව කළ යුතුය.

· ඇක්රිලමයිඩ්සහ BIS (N, N '- මෙතිලීන් ද්විත්ව ඇක්‍රිලමයිඩ්) යනු ජෙල් අනුකෘතියේ මොනොමර් ආකාරයයි.

· ඇමෝනියම් පර්සල්ෆේට් ඇලවුම් බහුඅවයවීකරණ ක්රියාවලිය ආරම්භ කරයි. මැලියම් සකස් කිරීම සඳහා ජලය තුළ සකස් කරන ලද 10% ඇමෝනියම් පර්සල්ෆේට් විසඳුමක් අවශ්ය වේ. බොහෝ තොරතුරු සක්‍රීය භාවිතයේ අවශ්‍යතාවය පෙන්නුම් කරයි. කෙසේ වෙතත්, 10% විසඳුම සැලකිය යුතු ක්‍රියාකාරිත්වයකින් තොරව සති කිහිපයක් සඳහා 4℃ හි තැබිය හැකිය. 10 ml දක්වා සාදා මැලියම් එකතු කිරීමට අසමත් වූ විට ඉවතලන්න.

ඉඟිය: ප්‍රතිශතයඇක්රිලමයිඩ්මැලියම් සහ ප්‍රෝටීන් මැලියම් අනුක්‍රමණය කිරීමේදී සමාන නොවේ. පෙර සැකසූ ඇක්‍රිලමයිඩ්: BIS ද්‍රාවණය භාවිතා කරන්නේ නම්, නිවැරදි බෝතලය ලබා ගැනීමට වග බලා ගන්න.

· TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) යනු දුඹුරු බෝතලයක, ශීතකරණයේ තබා ඇති උත්ප්‍රේරකයකි. මැලියම් වත් කිරීමට පෙර එකතු කරන්න.

· පොලිඇක්‍රිලමයිඩ් විද්‍යුත් විච්ඡේදනය විද්‍යුත් විච්ඡේදනයේදී භාවිතා කරන ලද වීදුරුව සෑම විටම පෙර සහ පසු සේදිය යුතුය. විද්යුත් විච්ඡේදනය කිරීමෙන් පසු, උණුසුම් සබන් වතුරේ මෘදු බුරුසුවක් සහ රෙදි කඩකින් සෝදා, ආස්රැත ජලය සමග මෙයට පිළියමක් සහ වියළීම සඳහා නැගී සිටින්න.

· තෙතමනය හා දූවිලි හිස් පොලිමර් සමඟ ඇති විය හැක. විද්‍යුත් විච්ඡේදනයට පෙර, වීදුරු තහඩුව වීදුරු ක්ලීනර් සමඟ පිරිසිදු කර මෘදු බුරුසුවකින් පිස දමන්න. ආස්රැත ජලයෙන් සෝදා කඩදාසි පිසදැමීමකින් හොඳින් වියළා ගන්න. කඩදාසිවලින් පිස දැමීමට පෙර 70% එතනෝල් සමඟ සේදීම පිරිසිදු කිරීමට සහ වියළීම වේගවත් කිරීමට උපකාරී වේ. ඇක්‍රිලමයිඩ් සාම්පල අනුපිළිවෙලින් එකතු කරන්න: BIS, ජලය, බෆර ද්‍රාවණය, ඇමෝනියම් පර්සල්ෆේට්, TEMED. හොඳින් සොලවා වහාම වත් කරන්න.

බහුඅවයවීකරණයට පෙර පොලිඇක්‍රිලමයිඩ් වායුව ඉවත් කිරීම අවශ්‍ය නොවේ. (ඔක්සිජන් බහුඅවයවීකරණය වළක්වන බැවින් බුබුලු ඉවත් කිරීම සඳහා ඇක්‍රිලමයිඩ් රික්තකයක් තුළ තබා ඇත.)

තිරස් මැලියම් ලක්ෂ්ය සාම්පල ඉඟි.

· වඩාත් පැහැදිලිව දැකීමට නියැදි සිදුරක් සෑදීමට කළු පැහැති කඩදාසි කැබැල්ලක් පහළ පෙට්ටියට දමන්න.
· මැලියම් ටැංකිය පිරවූ බෆරය, කොලොයිඩ් වලට ඉහළින්.
· දාරයේ ආලෝකයක් තිබේ නම්, විදුලි පහන් දල්වන්න, ආලෝකය කොලොයිඩ් බැබළීමට ඉඩ දෙන්න. නියැදිය පයිප්පයට අඳින්න.
· ස්වයංක්‍රීය පයිප්ප තැබීමේ උපකරණය භාවිතා කිරීම.
· 10-200 mu 1 ද්‍රව චලනය වන ලක්ෂ්‍යය නියැදියේ බොහෝ ලක්ෂ්‍යවල භාවිතා කළ හැක. ඉතා කුඩා නියැදි සිදුරු සඳහා (10μ1 ට අඩු), මැලියම් අනුපිළිවෙල සඳහා භාවිතා කරන දිගු පයිප්ප හිස වඩාත් පහසු වේ.

· නියැදියේ ගිල්වා, සෙමින් චලනය වන තරල ආශ්වාස කරන පයිප්ප. නියැදිය glycerin සමඟ ඇලෙන සුළු ලෙස දිස්විය හැකි අතර, වේගවත් පොම්ප කිරීම මගින් පයිපෙට් හිසට වායු බුබුලු ඇද ගත හැක.

· පයිප්ප හිස ආශ්වාස කිරීමෙන් පසු සාම්පල, ජල බිඳිති වලින් පිටත දියර හිස නළයේ කෙළවරට හෝ පිසදැමීමේ කඩදාසිවලින් දියර හිස මෘදු ලෙස චලනය කරයි. නියැදිය උරා නොගැනීමට වගබලා ගන්න.

නියැදිය සාම්පල කුහරයට දමන්න

· කුඩා පීඩනයක් තබා ගැනීම සඳහා පයිප්ප තැබීමේ උපකරණය, සාම්පල තරමක් පිටාර ගැලීම දියර හිස චලනය කරන්න.
· බෆරයට ඇතුල් කරන ලද පයිප්ප හිස, ස්ථාන සිදුරු වලට වඩා තරමක් ඉහළ, ධනාත්මක පීඩනය පවත්වා ගනී. පයිප්පයේ කෙළවර කුඩා සිදුරකට ඇතුල් කළ හැකිය.
· සෙමින් හා ස්ථාවරව සාම්පල පිටතට. Pipette tip ලක්ෂ්‍ය නියැදි කුහරයට ඉහලින් තබා ඇති අතර, නියැදිය කුහරය තුලට ගිල්වනු ඇත. තල්ලු කිරීම වෙනුවට නියැදි සිදුර පිරවීම සඳහා නියැදිය ගිල්වීමට ඉඩ දෙන්න.
· දියර හිස සහිත නියැදියේ අවසාන බිංදුවෙන් පසු, දියර දෙවන පාදයට ගමන් කරයි, දියර චලනය සෙමින් ඉහළ නංවයි, බෆරයෙන් පිටතට යයි

සිරස් මැලියම් නියැදීම සිදු කරන්නේ කෙසේද?

· සිරස් මැලියම් ලක්ෂ්ය නියැදි සිදුරු වීදුරු දෙකක් අතර පිහිටුවා ඇත. ඉතා තුනී මැලියම්වල, වීදුරු තහඩු දෙකක් අතරට පවා පයිප්ප හිස ඇතුල් කළ නොහැක. ග්ලිසරින් බලන්න! නියැදි සිදුර මත පයිප්ප හිස දමන්න, එවිට නියැදිය සිදුර තුළට ගිලී යනු ඇත.
· ලක්ෂ්‍ය සාම්පලයට පෙර, පොලිප්‍රොපිලීන් ඇසිල් ජෙල් සාම්පලයේ සිරස් ලක්ෂ්‍යය තැබීමට වග බලා ගන්න නියැදි සිදුර සෝදා පිරිසිදු කර ඇත. නියැදි සිදුරේ පතුලේ දිස්විය හැකි බහුඅවයවීකරණය නොකළ ඇක්‍රිලමයිඩ් සහ ජලය සෝදා හරින්න. ජලය නියැදි කුහරය සැලකිය යුතු ලෙස කුඩා කළ හැක. 25ml හෝ 50ml සිරින්ජයක් සහ මිනුම් 18ක ඉඳිකටුවක් භාවිතා කරන්න. විද්‍යුත් විච්ඡේදක බෆරයට වත් කර සාම්පල සිදුර ප්‍රවේශමෙන් සෝදා හරින්න.
· නියැදි සිදුර බැලීම අපහසු විය හැකි නමුත්, ඒ සමඟම, ඉතිරිය පහසු වේ. අතිරික්ත සිදුරු තිබේ නම්, නියැදි බෆරය බ්‍රොමොෆෙනෝල් නිල් සමඟ පරීක්ෂා කළ හැකිය.

 


පසු කාලය: මාර්තු-31-2023